今天,我想和大家分享一些关于高效液相色谱柱(高效液相色谱柱的类型)的问题。以下是这个问题的总结。让我们来看看。
如何有效选择高效液相色谱柱
使用高效液相色谱时,将待测液体注入色谱柱,并通过压力在固定相中移动。由于被检测物种的不同物质与固定相之间的相互作用不同,不同的物质依次离开色谱柱并通过检测器获得不同的峰信号。通过分析和比较这些信号,可以判断待检测物质中包含的物质。
高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛应用于化学和生化分析中。高效液相色谱与经典液相色谱在原理上没有本质区别。其特点是高压输液泵、高灵敏度检测器和高效颗粒固定相,适用于分析高沸点、高分子量和不同极性的有机化合物。高效液相色谱(HPLC)使用粒径更细的固定相填充色谱柱,增加色谱柱的塔板数,并以高压驱动流动相,使经典液相色谱需要几天甚至几个月的分离工作可以在几小时甚至几十分钟内完成。
高效液相色谱柱原理,哪些因素与柱保留时间有关?
保留时间:样品流出色谱柱所需的时间。不同的物质在不同的色谱柱上用不同的流动相洗脱时会有不同的保留时间,因此保留时间是色谱分析中比较重要的参数之一。
保留时间由色谱中物质的分配系数决定:
rt = t0(1+kV/虚拟机)
其中Rt代表物质的保留时间,t0是色谱系统的死时间,即流动相从进入色谱柱到流出色谱柱的时间由色谱柱的孔径、流动相的流速等因素决定。k为分配系数,vs和VM代表固定相和流动相的体积。该公式又称色谱过程方程,是色谱中最基本的公式之一。
高效液相色谱与色谱柱分离纯化的区别
1.压力液相色谱柱(尤其是分析型高效液相色谱):压力相对较高,一般为10-20 MPa;;色谱柱:一般为大气压,或使用真空泵空(约0.1Mpa)。
2.填充液相色谱柱:较小粒径(常规5-20微米)色谱柱:较大粒径3。分辨率由第二项决定。粒径越小,单位长度的理论塔板数越高。液相色谱柱:比色谱柱4有更好的分离度。高效液相色谱柱:分离速度快,通常在一小时内完成。色谱柱:分离时间长,一小时以上。
在新的HPLC色谱柱正式使用之前,您需要做什么,例如流动相洗涤的比例是多少?
新买的“HPLC柱”一般需要做三件事:1。用甲醇清洗色谱柱30分钟至1小时;2.第一步,用甲醇:水= 1:: 9为流动相冲洗柱子30分钟以上;3:完成上述两个步骤,然后用流动相清洗色谱柱30分钟以上。
重新注入。上面的甲醇是色谱级的,水一般用超纯水和二次蒸馏水。流动相只能在0.45微米膜过滤和脱气后使用。应根据流速选择合适的PH保护柱。
高效液相色谱(HPLC)柱峰厚、顶部圆、柱效低。怎么处理?
高效液相色谱柱效低通常是由于系统泄漏造成的,处理方法如下:
1.找到所有接口,特别是色谱柱两端的接口,并拧紧泄漏;
2.当然,泵内可能有空气体,但此时压力往往不稳定,忽高忽低,更严重的是泵无法吸出液体。处理方法:打开吹扫阀,以3.5毫升/分钟的流速冲洗。如果失败,请使用专用注射器通过外力吸出排气阀空处的气泡。高效液相色谱的色谱柱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器等几部分组成。高压泵将储液器中的流动相泵入系统,样品溶液通过取样器进入流动相,并由流动相加载到色谱柱(固定相)中。由于样品溶液中各组分在两相中的分配系数不同,当它们相对移动时,经过反复的吸附-解吸分配过程后,各组分的移动速度差异很大,它们被分离成单一组分并依次流出色谱柱。当通过检测器时,样品浓度被转换成电信号进行传输。
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