今天,我想和大家简单介绍一下分子筛效应。以下是这个问题的总结。让我们来看看。
分子筛效应介绍
分子筛效应是一个生物化学术语,是指当含有各种分子的样品溶液缓慢流过凝胶色谱柱时,每个分子同时以两种不同的方式移动。
解释聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的三种效应
我也在寻找这个问题的答案。
以下是我的发现。我还没整理好。你应该简化它,它应该工作。
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三种物理效应:
1.样本浓度效应
1)凝胶的孔径不连续:在三层凝胶中,样品胶和浓缩胶为大孔胶,在两层凝胶中,样品/浓缩胶为大孔胶,分离胶为小孔胶;在电场的作用下,被分离的物体在大孔径内运动时阻力小、速度快。当进入小孔径胶时,分离的物体运动阻力大,运动速度慢。因此,在两种胶的交界处,由于凝胶的不连续孔径,样品被阻止移动并压缩到非常狭窄的区域。
2)离子组成和缓冲体系pH值的不连续性:在浓缩凝胶中,被分离物质的pI介质与前导离子和拖尾离子的pK一起向正极移动,并被浓缩到一个非常狭窄的区域。
3)电位梯度的不连续性:在不连续的系统中,电位梯度的差异是自动形成的。电泳开始后,由于铅离子的迁移率最大,很快就会超过分离的物体,因此在快速离子的后面形成了一个离子浓度较低的区域。此时,存在高电位梯度。这种高电位梯度使分离的物质和拖尾离子更快地移动到前导离子后面。当前导离子、分离物质和拖尾离子的移动速度相同时,就建立了稳定状态。此时,在前导离子和拖尾离子之间形成了一个稳定和移动的界面,这是样品富集的中间层。
2.电荷效应
在浓缩凝胶中,分离物质的组分集中,特别是在浓缩凝胶和分离凝胶的边界处,形成狭窄的高浓度区。然而,当进入分离凝胶时,被分离物质中的组分具有不同的电荷,但具有不同的迁移率,表面电荷更多且迁移缓慢,反之亦然。因此,分离出的物质根据电荷、分子量和形状按一定的顺序排列。
3.分子筛效应
当不同分子量或分子大小和形状的分离物质通过一定孔径的分离凝胶时,阻塞程度不同,它们表现出不同的流动性,这就是分子筛效应。
浓缩后,先导离子、分离物质和拖尾离子都进入分离凝胶。此时凝胶的pH值不同,使得前导离子和拖尾离子的迁移率相同,不会形成高电压,所有物质都在相同且均匀的电压梯度下迁移。此时,分子量的大小和形状与其流动性密切相关:分子量小,呈球形快速移动。
凝胶色谱原理
凝胶色谱的原理是凝胶色谱的固定相是多孔凝胶物质,流动相是水溶液或有机溶剂,根据不同分子体积的大小进行分离。小分子可以扩散到凝胶空间隙中并通过,峰值最慢;中等分子只能中速通过部分凝胶空间隙,而大分子被排除在外,峰值最快。溶剂分子小,所以末端有峰,死体积前有峰;相对分子质量在100-105范围内的化合物可以通过质量分离。
凝胶色谱,也称为分子排阻色谱,基于分子筛的原理,常用于分离有机大分子,如蛋白质、肽和多糖。它对高分子材料具有很高的分离效果。大分子由于直径较大,难以进入凝胶颗粒的微孔,只能分布在颗粒之间,因此洗脱时向下移动速度较快。
小分子物质不仅可以在凝胶颗粒之间的空间隙中扩散,还可以进入凝胶颗粒的微孔,即凝胶相。在向下移动的过程中,它们从一个凝胶扩散到颗粒之间的空间隙,然后进入另一个凝胶颗粒。所以它们继续进入和扩散,小分子物质的向下运动速度落后于大分子物质,因此样品中的大分子首先流出色谱柱,然后中等分子流出,最后最小分子流出。
分子筛效应:当含有各种分子的样品溶液缓慢流过凝胶柱时,每个分子同时以两种不同的方式运动,即垂直向下运动和非定向扩散运动。大分子由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,只能分布在颗粒之间,因此洗脱时向下移动很快。
小分子物质不仅可以在凝胶颗粒之间的空间隙中扩散,还可以进入凝胶颗粒的微孔,即凝胶相。在向下移动的过程中,它们从一个凝胶扩散到颗粒之间的空间隙,然后进入另一个凝胶颗粒。所以它们继续进入和扩散,小分子物质的向下运动速度落后于大分子物质,因此样品中的大分子首先流出色谱柱,然后中等分子流出,最后最小分子流出。这种现象被称为分子筛效应。
凝胶过滤色谱和凝胶电泳中的分子筛效应有什么区别?请尽可能全面。
分子筛效应:大分子进不去的时候先出去,小分子后出去;凝胶电泳根据电场中不同的作用力分离带电分子,导致不同的移动速度;因此,大小适中的分子可以进入色谱柱的空间隙。
具有网状结构的凝胶的分子筛功能用于根据分子大小分离物质。色谱柱中的填料是一些惰性多孔网状物质,大多是交联多糖。
小分子物质可以进入其内部并向下流动很长一段距离,而大分子物质被排除在外,向下的距离很短。当混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时,溶液中的物质根据不同的分子量进行筛选。
扩展数据:
当一个分子被置于电场中时,它会以一定的速度向相应的电极移动。这种电泳分子在电场作用下的迁移速度称为电泳迁移率。
它与电场强度和电泳分子本身携带的净电荷成正比。也就是说,电场强度越大,电泳分子携带的净电荷越多,其迁移速度就会越快,反之亦然。
电泳的迁移率与分子的摩擦系数成反比,因为电泳中使用了非反应性和稳定的支持介质,如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶,这减少了对流运动。
百度百科-凝胶过滤色谱
百度百科-凝胶电泳
圆盘电泳的分子筛效应和凝胶过滤的分子筛效应在原理上有什么区别?
圆盘电泳的分子筛效应,分子越大,阻力越大,游动速度越慢;
凝胶过滤的分子筛效应,分子越紧密,层析越快。
使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有高分辨率的三个因素是什么?
使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有高分辨率的三个因素是:
1.电荷效应;
2.分子筛效应;
3.浓度效应。
聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(Bis)在过硫酸铵(APS)、N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合交联形成的三维网络凝胶,用作电泳的支持物。
扩展数据:
聚丙烯酰胺凝胶电泳可以根据不同蛋白质分子的电荷不同以及分子大小不同导致的迁移率不同,将蛋白质分离成几个条带。如果分离和纯化的样品只含有相同的蛋白质,电泳后只需从蛋白质样品中分离出一条条带。
SDS是一种阴离子表面活性剂,能破坏蛋白质的氢键和疏水键,与蛋白质分子按一定比例结合形成密度相同的短棒状复合物。不同分子量的蛋白质形成的复合物长度不同,其长度与蛋白质的分子量呈正相关,这使得蛋白质的负电荷远远超过其原始电荷,掩盖了各种蛋白质分子之间的天然电荷差异。
以上是分子筛效应的介绍。不知道你有没有从中找到你需要的信息?如果你想了解更多这方面的内容,记得关注这个网站。